Pagrindiniai jo projektavimo, konstrukcijos ir eksploatavimo valdymo reikalavimai, siekiant išvengti kryžminio užteršimo eksploatacijos metu:
1. Laboratorijų projektavimas ir konstrukcija, saugaus darbo sistema arba saugos standartinės darbo procedūros turi atitikti galiojančios&citatos reikalavimus; Bendrieji reikalavimai laboratorinės biosaugos" GB19489.
2. PGR yra padalinta į keturias funkcines sritis pagal darbo etapus, ty reagentų laikymo ir paruošimo sritis, mėginio paruošimo sritis, amplifikacijos sritis ir amplifikacijos produkto analizės sritis. Jei yra realaus laiko fluorescencinė PGR priemonė, amplifikacijos ir produkto analizės sritis galima sujungti. Kiekviena funkcinė sritis turi būti aiškiai pažymėta, o įranga ir gaminiai, esantys skirtingose funkcinėse srityse, neturi būti maišomi.
PGR laboratorijos oro srauto kryptis gali būti vykdoma pagal reagentų laikymo ir paruošimo plotą → mėginio paruošimo plotą → amplifikacijos plotą → amplifikuoto produkto analizės plotą, kad amplifikuoti produktai nepatektų į iš anksto amplifikuotą plotą kartu su oro srautu. Tai gali būti atliekama mažinant oro slėgį iš reagentų laikymo ir paruošimo srities → mėginio paruošimo sritis → amplifikacijos sritis → amplifikavimo produkto analizės sritis. Tai galima pasiekti sumontuojant išmetimo ventiliatorius, neigiamo slėgio išmetimo įtaisus ar kitus įmanomus metodus.
3. Įeinant į kiekvieną darbo sritį reikia griežtai laikytis vienos krypties, tai yra, reagentų laikymo ir paruošimo srities → mėginio paruošimo srities → amplifikacijos srities → amplifikavimo produkto analizės srities. Turi būti naudojamos skirtingos darbo sritys (pavyzdžiui, skirtingų spalvų). Išeidami iš darbo zonos, darbuotojai negali nusivilkti darbo drabužių.
4. Laboratorija turi būti valoma reagentų laikymo ir paruošimo srities → mėginio paruošimo srities → amplifikacijos srities → amplifikuotos produkto analizės srities kryptimi. Skirtingi eksperimentiniai plotai turėtų turėti savo valymo prietaisus, kad būtų išvengta kryžminio užteršimo.
5. Pasibaigus darbui, darbo vietą reikia nedelsiant išvalyti. Laboratorijos stendo paviršius, esantis darbo vietoje, turėtų būti atsparus chemikalų, tokių kaip natrio hipochloritas, dezinfekavimo ir valymo poveikiui. Švitinimas ultravioletiniu spinduliu laboratorijos stendo paviršiuje turėtų būti patogus ir efektyvus. Kadangi ultravioletinių spindulių švitinimo atstumas ir energija yra labai svarbūs nukenksminimo efektui, galima naudoti kilnojamąją ultravioletinę lempą (254 nm bangos ilgį), o atlikus darbą ją galima sureguliuoti taip, kad ji būtų švitinama 60–90 cm atstumu ant eksperimentinio stalo . Kadangi amplifikuotas produktas yra tik keli šimtai ar dešimtys bazinių porų (bp), jis nėra jautrus UV pažeidimams, todėl UV spinduliuotės amplifikuotas fragmentas turi būti švitinamas ilgesnį laiką, geriausia per naktį.
Reagentų laikymo ir paruošimo srities funkcijos yra šios: laikymo reagentų paruošimas, reagentų paskirstymas ir amplifikacijos reakcijos mišinio paruošimas, taip pat medžiagų, tokių kaip centrifugos mėgintuvėliai ir antgaliai, laikymas ir paruošimas. Medžiagos, tokios kaip laikymo reagentai ir eksploatacinės medžiagos, naudojamos mėginių paruošimui, turėtų būti tiesiogiai gabenamos į reagentų laikymo ir paruošimo vietą ir negali patekti per amplifikacijos aptikimo zoną. Rinkinyje esančios teigiamos kontrolės ir kokybės kontrolės medžiagos neturėtų būti laikomos šioje vietoje, bet turėtų būti laikomos šioje vietoje. Mėginio apdorojimo sritis.
Mėginio paruošimo srities funkcija yra: nukleino rūgšties (RNR, DNR) ekstrahavimas, laikymas ir įdėjimas į amplifikacijos reakcijos mėgintuvėlį. Atliekant operacijas su klinikiniais mėginiais, turėtų būti laikomasi antrinės biologinės saugos laboratorijų saugos priemonių, asmens apsaugos ir eksploatavimo specifikacijų. Maišant mėginius ir gryninant nukleorūgštis, gali būti, kad aerozoliai gali būti užteršti, šioje vietoje galima nustatyti teigiamo slėgio sąlygas, kad būtų išvengta aerozolių užteršimo iš gretimų sričių. Įpilant tiriamą nukleorūgštį, kad būtų išvengta kryžminio užteršimo tarp mėginių, reakcijos vamzdelis, kuriame yra reakcijos mišinys, turi būti uždengtas. Jei tai yra užkrečiamos medžiagos, dangtis turi būti atidarytas biologinės saugos kabinete ir turi būti aiški mėginių tvarkymo ir inaktyvavimo tvarka.
Amplifikacijos zonos funkcija yra: DNR sintezė, DNR amplifikacija ir aptikimas. Norint išvengti aerozolių keliamos taršos, reikėtų kuo mažiau vaikščioti toje vietoje. Reikia pažymėti, kad šioje vietoje neturi būti atidaromi visi išbandyti reakcijos vamzdeliai.
Padaugintos produkto analizės srities funkcija yra: tolimesnė amplifikuotų fragmentų analizė ir nustatymas, pavyzdžiui, hibridizavimas, fermento skaidymo elektroforezė, didelio efektyvumo skysčių analizė, sekos nustatymas ir kt. Nukleorūgšties amplifikacijos produktai turi įvairius analizės metodus, tokius kaip zondo hibridizacijos metodai. ant membranų arba ant mikro plokštelių ar drožlių (ženklinimas radionuklidais arba neradioaktyvus nuklidų žymėjimas), tiesioginė arba suskaidyta agarozės gelio elektroforezė, poliakrilamido gelio elektroforezė, pietų pernešimas, nukleorūgščių sekos nustatymo metodai, masės spektrometrija ir kt.
Amplifikacijos produkto analizės sritis yra pagrindinis amplifikacijos produkto užteršimo PGR laboratorijoje šaltinis, todėl reikėtų stengtis, kad amplifikacijos produktas neišneštų pro dirbinius ir darbo drabužius šioje srityje. Naudojant PGR-ELISA metodą amplifikuotiems produktams aptikti, plokštelėms plauti reikia naudoti plokštelių ploviklį, o panaudotas skystis turi būti surenkamas į 1 mol / l HCl ir negali būti pilamas laboratorijoje, tačiau turi būti išmestas. iš PGR laboratorijos. Lašas. Panaudotas antgalis taip pat turi būti mirkomas 1 mol / l HCl ir įdėtas į šiukšlių maišą, kad būtų sunaikintas pagal procedūras, pavyzdžiui, sudeginimą. Kadangi šioje srityje gali būti naudojamos tam tikros genetinės mutacijos ir toksiškos medžiagos, tokios kaip etidžio bromidas, akrilamidas, formaldehidas ar radionuklidai ir kt., Reikėtų atkreipti dėmesį į saugią eksperimentų saugą.